Labutin: Автоматические ворота и рольставни по ценам производителя в Москве.

Содержание

Законодательное собрание Ленинградской области

Бокситогорский избирательный округ №12 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Бокситогорскому одномандатному избирательному округу №12 Депутат от округа: ПУСТОТИН Николай Иванович Волосовский избирательный округ №22 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области от Волосовского одномандатного избирательного округа №22 Депутат от округа: ГУСТОВ Вадим Анатольевич Волховский избирательный округ №10 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Волховскому одномандатному избирательному округу №10 Депутат от округа: ОРЛОВ Владимир Николаевич Всеволожский избирательный округ №7 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Всеволожскому одномандатному избирательному округу №7. Депутат от округа: МАТВЕЕВ Александр Валентинович Выборгский избирательный округ №1 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Выборгскому одномандатному избирательному округу №1 Депутат от округа: МАКАРОВ Михаил Валентинович
Гатчинский избирательный округ№19
Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Гатчинскому одномандатному избирательному округу № 19 Депутат от округа: БЕЗДЕТКО Татьяна Викторовна Каменногорский избирательный №2 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Каменногорскому одномандатному избирательному округу №2. Депутат от округа: ПЕТРОВ Олег Александрович Кингисеппский избирательный округ №24 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Кингисеппскому одномандатному избирательному округу № 24 Депутат от округа: ВОРНОВСКИХ Дмитрий Владимирович Киришский избирательный округ №14 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Киришскому одномандатному избирательному округу №14. Депутат от округа: ТЮРИНА Татьяна Венедиктовна
Кировский избирательный округ №9
Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Кировскому одномандатному избирательному округу №9 Депутат от округа: МАЛЫК Вадим Витальевич Коммунарский избирательный №17 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Коммунарскому одномандатному избирательному округу №17 Депутат от округа: ПУНКИНА Лариса Максимовна Ломоносовский избирательный округ №20 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Ломоносовскому одномандатному избирательному округу №20. Депутат от округа: ЛАБУТИН Павел Алексеевич Лужский избирательный округ №23 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Лужскому одномандатному избирательному округу №23 Депутат от округа: КОВАЛЬ Никита Олегович Никольский избирательный округ №16 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Никольскому одномандатному избирательному округу №16 Депутат от округа: ХАБАРОВ Иван Филиппович
Приозерский избирательный округ №4
Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Приозерскому одномандатному избирательному округу №4. Депутат от округа: ПОТАПОВА Светлана Леонидовна Свердловский избирательный округ №8 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Свердловскому одномандатному избирательному округу №8 Депутат от округа: АЛИЕВ Саяд Исбарович Свирский избирательный округ №11 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Свирскому одномандатному избирательному округу №11 Депутат от округа: БЕБЕНИН Сергей Михайлович Сертоловский избирательный округ №5 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Сертоловскому одномандатному избирательному округу №5 Депутат от округа: ВЕРНИКОВСКИЙ Александр Павлович
Сиверский избирательный округ №18
Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Сиверскому одномандатному избирательному округу №18 Депутат от округа: ТЕПТИНА Людмила Анатольевна Сосновоборский избирательный округ №21 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Сосновоборскому одномандатному избирательному округу №21. Депутат от округа: ПУЛЯЕВСКИЙ Дмитрий Витальевич Тихвинский избирательный округ №13 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Тихвинскому одномандатному избирательному округу №13. Депутат от округа: ПЕТРОВ Александр Евгеньевич Токсовский избирательный округ №6 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Токсовскому одномандатному избирательному округу №6 Депутат от округа: КАРАВАЕВ Сергей Сергеевич Тосненский избирательный округ №15 Депутат Законодательного собрания Ленинградской области по Тосненскому одномандатному избирательному округу №15 Депутат от округа: ЛОБЖАНИДЗЕ Арчил Алексеевич

Герои страны

Поиск Фамилия
Поиск Google

Страница не найдена


Лабутин Александр Николаевич | Ivanovo State University of Chemistry and Technology

Окончил в 1971г. Ивановский химико-технологический институт по специальности  «Автоматизация и комплексная механизация химико-технологических процессов».

Доктор технических наук; спец. 05.17.08 – Процессы и аппараты химической технологии. Тема диссертации: «Анализ и оптимальный синтез многопродуктовых реакторных систем». Диссертационный совет Д 053.34.08 при РХТУ им. Д.И. Менделеева.

Профессор по кафедре технической кибернетики и автоматики.

Преподаваемые дисциплины:

- Моделирование систем управления», «Основы системного анализа», для студентов обучающихся по:
- направлению подготовки бакалавра 15.03.04 «Автоматизация технологических процессов и производств», профилю «Автоматизация технологических процессов и производств»;
- направлению подготовки бакалавра 27.03.04 «Управление в технических системах», профилю «Системы и средства автоматизации технологических процессов»;

Направление научных исследований – анализ, оптимизация и управление энерго и ресурсосберегающими многопродуктовыми реакторными системами.

Последние публикации:

1. Гордеев Л.С., Лабутин А.Н., Гордеева Е.Л. Синтез оптимальных многопродуктовых ресурсосберегающих реакторных систем // Теоретические основы химической технологии. 2014. Т.48. № 5. С. 580;
2. Лабутин А.Н., Невиницын В.Ю. Аналитический синтез управления химическим реактором // Теоретические основы химической технологии. 2014. Т.48. № 3. С. 318. 

Повышение квалификации:

Институт качества высшего образования ФГАОУ ВПО «Национальный исследовательский технологический университет "Московский институт стали и сплавов», удостоверение № 722 от 26.06.2013, в период с 24.04.13 по 26.06.13  в объеме 72 рабочих часов. Приказ Минобрнауки №47 от 25.01.13

 

Лабутин Александр Сергеевич, Врач психиатр-нарколог Клиники Лазарет

Врач психиатр-нарколог

Опыт работы более 15 лет

Специализация

  • Психиатрия-наркология
  • Психиатрия
  • Диагностика и лечение неврологических осложнений алкоголизма
  • Клиническая психотерапия психических расстройств
  • Клиническая психотерапия в лечении и реабилитации наркологических пациентов

Образование

Кемеровская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации, 2004

Курсы повышения квалификации

  • Кемеровская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации, 2015, Психиатрия-наркология
  • ГБОУ ВПО КемГМА Минздравсоцразвития России, 2015, Психиатрия
  • Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова, 2016, Диагностика и лечение неврологических осложнений алкоголизма
  • Кемеровская государственный медицинский университет, 2017, Психиатрия (интернатура)
  • Институт психотерапии и медицинской психологии РПА им. Б.Д.Карвасарского, 2017, Клиническая психотерапия психических расстройств
  • Институт психотерапии и медицинской психологии РПА им. Б.Д.Карвасарского, 2017, Клиническая психотерапия в лечении и реабилитации наркологических пациентов
  • Институт психотерапии и медицинской психологии РПА им. Б.Д.Карвасарского, 2017, Психотерапия

Опыт работы

г. Кемерово, Наркологический клинический диспансер, 2005-2017

Клиника Лазарет, 2018 - по наст. время

Выпускник Кемеровской государственной медицинской академии министерства здравоохранения Российской Федерации. 15 лет в психиатрии, наркологии и психотерапии, повышал квалификацию в Москве – на базе Первого медицинского университета им.И.М.Сеченова и в Санкт-Петербурге – в Институте психотерапии и медицинской психологии им. Б.Д.Карвасарского. Врач, нацеленный на проведение полного цикла лечения наркологических больных, включая реабилитацию. «У больных на начальном этапе формирования трезвости часто создаётся иллюзия, что при выводе из запоя проблема решена, что они в дальнейшем смогут справляться самостоятельно. Но жизнь и медицинская практика показывают, что именно на этапе реабилитации следует сформировать навыки поддержания трезвости. И в дальнейшей трезвой жизни помощь врача должна быть востребована, чтобы избежать «срыва» в кризисных ситуациях».

Доктор Лабутин Александр Сергеевич

Лабутин Игорь Николаевич, студент 1-го курса магистратуры программы "Анализ больших данных в бизнесе, экономике и обществе"; преподаватель департамента информатики факультета Школа физико-математических и компьютерных наук

Номинация "Мечты сбываются"

 

Игорь Николаевич Лабутин – призер Всероссийских олимпиад школьников по информатике 2013 и 2014 годов, выпускник Физико-технического лицея СПбАУ 2014 года, выпускник бакалавриата «Прикладные математика и физика» Санкт-Петербургского Академического университета Российской Академии наук. В последний год обучения в бакалавриате СПбАУ РАН он активно занимался научной работой, подготовил к публикации 2 научные статьи – «Enumeraton of labelled and unlabelled Hamiltonian cycles in complete k-partite graphs» и «О некоторых перечислительных задачах лямбда-исчисления». Кроме того, он в течение последнего года являлся ассистентом по курсу «Комбинаторика и теория графов».

Летом 2018 года Игорь Николаевич поступил на магистерскую программу «Анализ данных в бизнесе, экономике и обществе» и одновременно стал преподавателем департамента информатики факультета Школа физико-математических и компьютерных наук. В настоящее время он ведет практические занятия в бакалавриате «Прикладная математика и информатика» по курсу «Комбинаторика и теория графов», а также занимается научной работой. К настоящему времени им подготовлена статья «Enumeration of 3-regular one-faced unsensed maps», а также доклад «Decision trees interpretation» на конференцию «ACML-2019».

2 декабря 2018 года Игорь в составе команды Питерской Вышки (вместе со студентами бакалаврской программы «Прикладная математика и информатика» Антоном Ермиловым и Александром Федоровым) завоевал в финале чемпионата по спортивному программированию Северной Евразии (Northeastern European Region Programming Contest) серебряные медали NEERC-2018 и прошел в финал чемпионата мира по спортивному программированию ACM ICPC, который состоится с 31 марта по 5 апреля 2019 года в городе Порту, Португалия. За пять часов ребята решили восемь сложнейших задач и стали восьмыми среди 299 команд, участвовавших в соревновании (пятыми среди вузов – участников соревнований).

Исходя и вышесказанного, считаем кандидатуру Игоря Николаевича Лабутина достойной получения награды в номинации «Мечты сбываются» премии «Вышка мечты» НИУ ВШЭ СПб. Выпускники Питерской Вышки, молодые, талантливые, перспективные исследователи с международным опытом и профессиональными амбициями по праву могу претендовать на самые высшие награды, формируя интеллектуальный потенциал не только в российской, но и в мировой научной сфере.

Павел Лабутин | Дискография | Discogs

Vocals

ZV 002 MC Маша И Медведь Маша И Медведь - Экстремальная Сказка ‎(Cass, Album) Zvezda Records ZV 002 MC Russia 1998 Продать эту версию

Instruments & Performance

none Депутат Балтики Депутат Балтики - Полупетроградская Аккустика ‎(Reel, Sel) Not On Label none USSR 1991 Продать эту версию
none Депутат Балтики Депутат Балтики - Комиссар Дымовой Жандармерии ‎(Cass, Album) Студия EB none USSR 1991 Продать эту версию
none ВИА Химера* ВИА Химера* - Фантазёры / Volnost ‎(Cass) Egazeba Records none Russia 1992 Продать эту версию
none Химера Химера - Химера (Album) 4 издания Not On Label (Химера Self-released) none Russia 1993 Продать эту версию 4 издания
none Дарвин (2) & ГПД* Дарвин (2) & ГПД* - Музыка Миллионов ‎(CD, Album) Elvis Ltd none Russia 1994 Продать эту версию
ROMP Prod. 003 Химера / Steine Für Den Frieden Химера / Steine Für Den Frieden - Химера / Steine Für Den Frieden ‎(7", EP) Romp Productions ROMP Prod. 003 Switzerland 1994 Продать эту версию
CAR 035 Химера Химера - Это Я (Live) ‎(Cass, Album) Caravan Records CAR 035 Russia 1997 Продать эту версию
TMT 001 Химера Химера - Żüdẇä (Album) 6 издания WhiteHorse Music Ltd. TMT 001 Russia 1997 Продать эту версию 6 издания
ZV 002 MC Маша И Медведь Маша И Медведь - Экстремальная Сказка ‎(Cass, Album) Zvezda Records ZV 002 MC Russia 1998 Продать эту версию
none Аукцыон / Волков* / Курашов* Аукцыон / Волков* / Курашов* - Зимы Не Будет ‎(CD, Single) O.G.I. Records none Russia 1999 Продать эту версию
none Химера Химера - Электричка Live In "TaMtAm" (Album) 2 издания Kapkan Records none Russia 2002 Продать эту версию 2 издания
none Хiмера* Хiмера* - Zudwa-Dwa (Album) 8 издания Kapkan Records none Russia 2002 Продать эту версию 8 издания
ATR 04222 Последние Танки В Париӝе* Последние Танки В Париӝе* - 2084 ‎(CD, Album) AnTrop ATR 04222 Russia 2004 Продать эту версию
none Хiмера* Хiмера* - Nuihuli (Album) 2 издания Fuzz (2) none Russia 2004 Продать эту версию 2 издания
none Химера Химера - Live In Størtebeker / Nuihuli (Album) 2 издания Kapkan Records none Russia 2005 Продать эту версию 2 издания
none Последние Танки В Париже Последние Танки В Париже - Ультиматум (Album) 4 издания Not On Label (Последние Танки В Париже Self-released) none Russia 2012 Продать эту версию 4 издания
SIYLP027 Последние Танки В Париже Последние Танки В Париже - Ключи От Всех Дверей (Album) 2 издания Издательство Сияние SIYLP027 Russia 2015 Продать эту версию 2 издания
none никого нет дома VHS и еще 1… никого нет дома - VHS (Album) 3 издания Not on label (никого нет дома Self-Released) none Russia 2017 Продать эту версию 3 издания

Лабутин - это... Что такое Лабутин?

  • Лабутин, И. К. — автор детских рассказов (1890 гг.). {Венгеров} …   Большая биографическая энциклопедия

  • Лабутин, Л. — птицевод 1912 г. {Венгеров} …   Большая биографическая энциклопедия

  • Лабутин, Р. В. — авт. брош. "По воле незримого Я. Экскурсия в сфере неразрешимых проблем" (СПб., 1898). {Венгеров} …   Большая биографическая энциклопедия

  • Лабутин Пётр Иванович — (1904—1942), рабочий, участник Великой Отечественной войны. С начала войны боец дивизии народного ополчения Октябрьского района, затем рядовой сапёрного батальона 189 й саперной дивизии (Ленинградский фронт). В ночь на 13 сентября 1942… …   Энциклопедический справочник «Санкт-Петербург»

  • Лабутин Иоанн Карпович — Лабутин, Иоанн Карпович духовный писатель, священник (1869 1912), воспитанник Петербургской духовной академии. Главные его работы: В чем состоит истинное богопочтение по псалмам 49 и 50? (СПб., 1892), Искушение Господа нашего Иисуса Христа в… …   Биографический словарь

  • Лабутин Пётр Иванович —       (1904 1942), рабочий, участник Великой Отечественной войны. С начала войны боец дивизии народного ополчения Октябрьского района, затем рядовой сапёрного батальона 189 й саперной дивизии (Ленинградский фронт). В ночь на 13 сентября 1942… …   Санкт-Петербург (энциклопедия)

  • Лабутин, Ал-др Семен. — врач, р. 1859. {Венгеров} …   Большая биографическая энциклопедия

  • Лабутин, Иоанн — свящ., дух. писатель 1900 гг. {Венгеров} …   Большая биографическая энциклопедия

  • Лабутин, Константин Алексеевич — (род. 12.11.1921) летчик истребитель, Герой Советского Союза (1991), генерал майор авиации. Участник Великой Отечественной войны с июня 1943 г. Воевал в составе 41 гв. иап, 927 иап ПВО, был командиром эскадрильи. Совершил 232 боевых вылета, в 63… …   Большая биографическая энциклопедия

  • Лабутин, Олег — Директор финансового департамента банка "Международная финансовая компания" с октября 2000 г.; родился в 1968 г.; окончил кредитно экономический факультет Государственной финансовой академии в 1992 г.; со времени окончания института… …   Большая биографическая энциклопедия

  • Дмитрий Лабутин - Разработчик программного обеспечения - Google | Профиль компании

    Google - транснациональная корпорация, специализирующаяся на услугах и продуктах, связанных с Интернетом. Портфель продуктов компании включает Google Search, который предоставляет пользователям доступ к информации в Интернете; ...

    Google - транснациональная корпорация, специализирующаяся на услугах и продуктах, связанных с Интернетом. Портфель продуктов компании включает Google Search, который предоставляет пользователям доступ к информации в Интернете; Сеть знаний, которая позволяет пользователям искать вещи, людей или места, а также строит системы, распознающие речь и понимающие естественный язык; Google Now, который предоставляет информацию пользователям, когда они в ней нуждаются; Товарные объявления, предлагающие изображение продукта, цену и информацию о продавце; AdWords, рекламная программа на основе аукционов; AdSense, который позволяет веб-сайтам, входящим в сеть Google, показывать рекламу; Google Display, сеть медийной рекламы; DoubleClick Ad Exchange, торговая площадка для торговых площадок для медийной рекламы; и YouTube, который предлагает видео, интерактивные и другие форматы рекламы.Кроме того, компания предлагает Android, платформу мобильного программного обеспечения с открытым исходным кодом; аппаратные продукты, включая устройства Chromebook, Chrome, Chromecast и Nexus; Google+, социальная платформа для обмена контентом с другими; Google Play, облачный магазин цифровых развлечений для приложений, музыки, книг и фильмов; Google Диск - место, где пользователи могут создавать, делиться, сотрудничать и хранить свои материалы; и Google Wallet, виртуальный кошелек для бесконтактных платежей в магазине. Кроме того, он предоставляет Google Apps, которые включают Gmail, Календарь и Сайты Google, которые созданы для того, чтобы люди могли работать где угодно, когда угодно и на любом устройстве без потери безопасности или контроля; Интерфейс программирования приложений Google Maps; Google Earth Enterprise, программное решение для визуализации изображений и данных; Google App Engine, платформа как услуга; Облачное хранилище Google; Google BigQuery для аналитики в реальном времени; Google Cloud SQL для языка структурированных запросов; и Google Compute Engine, платформа «инфраструктура как услуга».Он также предлагает мобильные беспроводные устройства и сопутствующие продукты и услуги. Google был основан Ларри Пейджем и Сергеем Брином в Маунтин-Вью, Калифорния, в 1998 году.

    Подробнее

    Антон Лабутин - Подробная статистика

    Эта страница содержит информацию о подробной статистике игрока. В информационном поле вы можете фильтровать по периоду, клубу, типу лиги и соревнованию. На вкладке «Подробная статистика» отображается общее количество матчей, количество голов, карточек и общее количество минут игры для каждого соревнования, а также указывается сезон, в котором это произошло.

    Фильтровать по сезону:

    Все сезоны16 / 1715/1614/1513/1412/1311/1210/1109/10

    Фильтр по клубам:

    Все клубыНоста НовотроицкСевер МурманскФК Оренбург

    Рейтинг в лиге / Тип лиги:

    Все типыВторой уровеньТретий уровеньДомашний кубок

    Фильтровать по конкуренции:

    Все соревнованияКубок России1.Дивизион Российские ФНЛ-2 Группа 2 Российские ФНЛ-2 Группа 4

    Фильтровать по позиции:

    Все позицииВратарь

    Фильтровать по автобусам:

    Все тренерыРоберт ЕвдокимовКонстантин ГалкинМихаил БеловАдям КузяевДмитрий ЕмельяновОлег СинелобовМихаил Трофимов

    Сергей Лабутин Профиль игрока - ChessBase Players

    • МАГАЗИН
    • ЯЗЫК
    • ПОИСК
    • ЛЕБЕДКА
    • СПИСКИ
      • 100 лучших в мире
      • Женщины Топ 100
      • Мальчики до 20 лет, первые 100
      • Топ-100 девушек до 20 лет
      • Пользовательский список

    * 1951 (70)

    Бест Эло

    2394

    Последний Эло

    2374

    Год рождения

    1951

    Fide
    Политика конфиденциальности | Отпечаток | Контакт
    © 2017 ChessBase GmbH | Остербекштрассе 90а | 22083 Гамбург | Германия

    Цитосовместимость костного трансплантата человека с мезенхимальными стромальными клетками сопоставима после термической стерилизации и промывки с последующим γ-облучением: исследование in vitro | Регенеративные биоматериалы

    Аннотация

    Аллотрансплантаты костей человека представляют собой лучшую альтернативу аутотрансплантатам с точки зрения минимизации осложнений, связанных с процедурой забора.Перед использованием в клинической практике они требуют стерилизации, направленной на снижение бионагрузки. Это часто происходит за счет их биологических свойств как переносчиков клеток. В этом исследовании мы оценили цитосовместимость человеческих костных аллотрансплантатов, обработанных и стерилизованных тремя различными методами с мезенхимальными стромальными клетками. Оценивали морфологию костей, биологические и биохимические свойства экстрагированной костно-кондиционированной среды и жизнеспособность клеток. Мы обнаружили, что химическая стерилизация оказала сильное отрицательное влияние на жизнеспособность клеток, тогда как термическая стерилизация и промывка с последующим γ-облучением привели к образованию костного трансплантата, совместимого с клетками-предшественниками.Кроме того, промывание кости перед стерилизацией позволило полностью удалить остатки клеток и другие компоненты костного мозга. В совокупности наши результаты демонстрируют важность правильного выбора метода обработки костного трансплантата для производства биоматериала, подходящего для тканевой инженерии.

    Введение

    Трансплантация человеческой кости широко применяется в ортопедии и челюстно-лицевой хирургии для восстановления костной ткани. Сюда входит лечение несрастающихся переломов, увеличение крупных костных дефектов и восстановление костного материала в ревизионных операциях по поводу перипротезного остеолиза [1–3].В зависимости от источника натуральные костные трансплантаты человека могут быть двух типов: аутогенные или аллогенные. Костные аутотрансплантаты обычно берут из гребня, малоберцовой кости или ребер подвздошной кости того же пациента, которому был проведен трансплантат. Стимуляция остеоиндукции и остеогенеза костными аутотрансплантатами объясняется факторами роста и клетками-предшественниками, переносимыми ими [4]. Хотя аутотрансплантаты остаются золотым стандартом для наращивания костной ткани, их широкое клиническое использование затруднено из-за частых осложнений после забора, что часто приводит к недостаточному количеству добытой кости для удовлетворения клинических требований.Наиболее частые осложнения включают инфекцию, кровопотерю, сосудисто-нервное повреждение и хроническую боль в области хирургического вмешательства [5]. В отличие от аутотрансплантатов, аллотрансплантаты являются более безопасной альтернативой, поскольку их можно получить в больших количествах из костей трупа или живых доноров. Их главный недостаток - более сложная процедура обработки, которая направлена ​​на подготовку кости к длительному хранению, устранение инфекционных патогенов и предотвращение отторжения трансплантата из-за потенциальной иммуногенности донорских клеток. Следовательно, этот процесс приводит к потере остеоиндуктивных и остеогенных свойств аллотрансплантата, поскольку полученный материал становится каркасом, лишенным белков и клеток.

    Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) представляют собой клоногенные взрослые клетки-предшественники, которые можно выделить из костного мозга, жировой ткани, пульпы зуба, синовиальной оболочки, надкостницы и других тканей [6]. Они характеризуются фибробластоподобным ростом, прилипанием к пластику и экспрессией отдельного набора маркеров CD: положительных для CD44, CD73, CD90, CD105 и отрицательных для CD11b, CD14, CD45. В специфических условиях in vitro, эти клетки также могут дифференцироваться по крайней мере по трем линиям: остеогенным, хондрогенным и адипогенным [7].Было показано, что МСК усиливают восстановление костного дефекта при местной доставке, но их точная роль в процессе заживления кости все еще плохо изучена [7, 8]. Вопреки ожидаемому прямому вовлечению остеогенно дифференцированных МСК в место повреждения, их вклад, по-видимому, в первую очередь осуществляется через секретом, содержащий факторы роста, которые привлекают клетки-остеопрогениторы из ниш стволовых клеток [9-11]. Следовательно, чтобы представить жизнеспособную альтернативу аутотрансплантатам, комбинация костных аллотрансплантатов с МСК могла бы быть полезной для восстановления их остеоиндуктивных и остеогенных свойств.Это станет возможным только в том случае, если методы обработки будут оптимизированы для сохранения биосовместимости костных аллотрансплантатов.

    Обработка костного аллотрансплантата обычно включает удаление остаточных тканей, окружающих восстановленную кость, и орошение с последующей дезинфекцией или окончательной стерилизацией. Несмотря на то, что методы стерилизации эффективны в снижении бионагрузки, они ухудшают не только целостность, но и биосовместимость аллотрансплантатов. В частности, бактериальный мусор и клеточные компоненты, оставшиеся внутри трансплантата после стерилизации, могут оказывать пагубное влияние на процесс остеоинтеграции [12, 13].Lomas et al. [14] ранее описал протокол промывки восстановленной донорской кости, который с тех пор был оптимизирован для лучшего удаления белка, жира, крови и костного мозга [15, 16]. Текущие научные данные о биологической эффективности промытых и γ-облученных костных аллотрансплантатов как каркасов для МСК по сравнению с другими методами обработки ограничены.

    Костнозамещающие материалы на основе сульфата кальция, фосфата кальция, гидроксиапатита или силиката могут служить альтернативой костным аутотрансплантатам [17, 18].Клинически одобренные синтетические заменители обычно поставляются в виде готовых наборов, которые, кроме смешивания компонентов, не требуют специальной подготовки или трудоемкой обработки [19]. Благодаря наличию взаимосвязанных пор эти материалы могут использоваться в качестве носителей для клеток-предшественников. Однако химический состав может повлиять на их совместимость с клетками. Некоторые продукты из фосфата кальция и гидроксиапатита продемонстрировали меньшую адгезию и метаболическую активность человеческих МСК по сравнению с костными аллотрансплантатами [20].Более того, хрупкость кальций-фосфатных цементов и высокая скорость резорбции сульфата кальция ограничивают их использование в несущих приложениях [21–23].

    Основной целью нашего исследования была доклиническая оценка цитосовместимости человеческих костных аллотрансплантатов, обработанных и стерилизованных тремя различными методами (химическим, термическим и промывкой с последующим γ-облучением) с помощью МСК.

    Материалы и методы

    Обработка и стерилизация добытой кости

    Исследование было одобрено Советом по институциональной этике, и доноры получили информированное согласие.Головки бедренной кости были извлечены во время операции у пациентов (возрастной диапазон 53–68 лет), перенесших тотальное эндопротезирование тазобедренного сустава. Полученный костный материал хранили при -80 ° C в стерильных полиэтиленовых контейнерах. Позже партии собранных головок бедренной кости обрабатывали в шкафу биологической безопасности MSC-9 (Thermo Fisher Scientific, США). После оттаивания в течение 8 ч при комнатной температуре и удаления посторонних тканей головы с помощью ручной медицинской пилы разрезали на блоки (кубики) со средней длиной стороны 0.5 см. Блоки инкубировали в течение ночи при 4 ° C в 400 мл физиологического раствора, содержащего 1,0 г ципрофлоксацина. После этого блоки были обработаны и стерилизованы тремя различными методами.

    Протокол химической стерилизации включал промывку блоков в 3,0% растворе гидрокарбоната натрия с помощью кисти и вымачивание в физиологическом растворе на 30 мин. После сушки при комнатной температуре костные блоки упаковывали в полиэтиленовые пакеты, заполненные дезинфицирующим раствором, и хранили при -20 ° C. Раствор содержал смесь лимонной кислоты, глюкозы, бромида натрия, 95% этанола, нитрофурала, диметилсульфоксида (ДМСО), амикацина в дистиллированной воде (Патент RU2235462).

    Термическая стерилизация заключалась в нагревании костных блоков, помещенных в герметичный контейнер с физиологическим раствором в стерилизаторе Lobator SD-2 (TELOS, Германия). Продолжительность протокола составила 94 мин, при этом температура стерилизации (82,5 ° C) поддерживалась не менее 15 мин. После охлаждения физиологический раствор сбрасывали через предохранительный клапан, и контейнер хранили при -20 ° C. Эта процедура стерилизации более подробно описана в [24].

    Обработка костных блоков промывкой γ-облучением была основана на ранее опубликованном протоколе и включала наши модификации [25].Вкратце, костные блоки перемешивали в дистиллированной воде в течение 60 минут при 59 ° C и очищали в гидродинамическом потоке воды в течение 15 минут. После этого были выполнены три последовательных цикла стирки.

    Первый цикл промывки состоял из 20 минут в 10% гидрокарбонате натрия, 15 минут в гидродинамическом потоке, 20 минут обработки ультразвуком (45 Гц) в 10% гидрокарбонате натрия при 59 ° C, 15 минут в гидродинамическом потоке, 15 минут за 10 минут. % гидрокарбоната натрия при перемешивании при 220 об / мин, центрифугировании 15 мин при 1850 g.

    Второй цикл промывки состоял из тех же этапов, что и предыдущий, только с дистиллированной водой вместо гидрокарбоната натрия.Всего было выполнено пять повторов.

    Третий цикл включал промывку в 3% перекиси водорода при 59 ° C на водяной бане со встряхиванием (22), ультразвуковом аппарате (45 Гц) и орбитальном шейкере (220 об / мин) по 20 минут каждый. После этого та же последовательность промывок была завершена 70% этанолом.

    Наконец, костные блоки встряхивали три раза по 15 мин в стерильной дистиллированной воде при 59 ° C. Блоки сушили 2 ч при 45 ° C и быстро замораживали при -80 ° C. В дальнейшем блоки лиофилизировали на HETO PowerDry PL3000 (Thermo Fisher Scientific, США) в течение 40 ч, упаковывали в двойные полиэтиленовые пакеты (Clinipack, Россия) средней длиной 5 см и подвергали γ-облучению на конвейерной ленте дозой 25 кГр при скорости 150 см / мин.Полученное среднее время экспозиции составило 2 с. Упакованные стерильные блоки хранили при -20 ° C.

    Среда для культивирования клеток

    Стандартная питательная среда: DMEM GlutaMAX с низким содержанием глюкозы, 15% фетальная телячья сыворотка (FCS), пенициллин 100 Ед / мл - стрептомицин 100 мкг / мл (Life Technologies, Великобритания).

    Остеогенная среда: DMEM GlutaMAX с низким содержанием глюкозы, 15% FCS, пенициллин 100 Ед / мл - стрептомицин 100 мкг / мл, 10 мМ гидрат динатриевой соли β-глицерофосфата, 10 нМ дексаметазон, 50 мкг / мл L-аскорбиновая кислота (Sigma -Олдрич, США).

    Хондрогенная среда: DMEM GlutaMAX с низким содержанием глюкозы, 1% FCS, пенициллин 100 Ед / мл - стрептомицин 100 мкг / мл, 1X ITX-G (Life Technologies, Великобритания), 50 мкг / мл L-пролина, 100 нМ дексаметазон, 50 мкг / мл L-аскорбиновой кислоты (Sigma-Aldrich, США), 10 нг / мл рекомбинантного человеческого TGFβ3 (Miltenyi Biotec, Германия).

    Клетки выращивали в атмосфере 5% CO 2 , если не указано иное.

    Среда для кондиционирования костей

    Костные блоки помещали в центрифужные пробирки объемом 50 мл, содержащие стандартную питательную среду без FCS.Количество среды составляло 2 мл на блок, всего 10 блоков на пробирку. Образцы инкубировали при 37 ° C при постоянном перемешивании при 200 об / мин. Через 24 ч среду собирали и центрифугировали при 2000 об / мин в течение 10 мин. Полученный супернатант разделяли на аликвоты в стерильные пробирки на 15 мл и хранили при -20 ° C.

    Концентрация белка и pH BCM

    Концентрация белка в среде, кондиционированной для костей (BCM), определялась в соответствии с инструкциями производителя на Qubit 3.0 флуорометр с использованием набора Qubit Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, США). Количество белка в контрольной среде вычитали из значений образца для получения конечных концентраций. Образцы бессывороточной среды служили отрицательным контролем. Костные блоки инкубировали в исходной среде и измеряли pH с помощью pH METER 410 («Аквилон», Россия) через 0 и 24 часа.

    Растровая электронная микроскопия

    Обработанные костные блоки фиксировали в течение ночи в 3,7% растворе формальдегида при 4 ° C.На следующий день блоки кратковременно промывали PBS и дегидратировали в серии возрастающих концентраций этанола: 35, 50, 70, 100% (каждый шаг 15 мин). Образцы сушили, покрывали распылением частицами золото / палладий и отображали на микроскопе JSM 6390LA (JEOL, Япония).

    Изоляция и расширение МСК

    Эксперименты на животных проводились в соответствии с местными и институциональными правилами. МСК выделяли из костного мозга самок крыс линии Вистар в возрасте 4 недель.Бедренные кости забирали у умерщвленных животных и хранили на льду. После удаления проксимального и дистального концов бедренной кости костный мозг промывали PBS в отдельные 15-миллилитровые пробирки, которые ненадолго встряхивали и центрифугировали в течение 5 минут при 1500 об / мин. Супернатант отбрасывали, и клетки ресуспендировали в 10 мл стандартной питательной среды. Концентрацию клеток определяли на автоматическом счетчике клеток Countess II FL (Thermo Fisher Scientific, США). Всего 6 × 10 6 клеток высевали в каждую лунку 6-луночного планшета для тканевых культур и инкубировали в течение ночи при 37 ° C.На следующий день питательную среду заменяли свежей и позволяли клеткам достичь 80% слияния. После этого клетки из каждой лунки переносили в отдельные колбы для тканевых культур Т75. Каждые 3-5 дней клетки промывали PBS, отделяли с помощью TrypLE Express (Life Technologies, UK), разделяли 1: 3 и добавляли свежую питательную среду до P3. Выделенные клетки замораживали в FCS с 10% ДМСО (Sigma-Aldrich, США) и хранили при -80 ° C. Фенотип МСК подтверждали на P4 на проточном цитометре CytoFLEX (Beckman Coulter, США) с использованием панели антител: мышиный анти-крысиный CD45 PE, мышиный анти-крысиный CD90 FITC (BD Pharmingen, США).МСК были идентифицированы как популяция не менее 95% CD90 + CD45-клеток.

    Дифференциация МСК

    МСК культивировали в остеогенной среде при 37 ° C в 24-луночном планшете для тканевых культур при плотности 100 × 10 3 на лунку в течение 14 дней. Среду меняли на новую каждые 3 дня. Остеогенез оценивали с помощью окрашивания клеток ализарином красным S (ARS) на наличие отложений кальция. Вкратце, клетки промывали один раз PBS и фиксировали 3.7% формальдегида в течение 10 мин. После двукратной промывки ddH 2 O клетки окрашивали раствором ARS (pH 4,3) в течение 10 мин. После этого клетки промывали один раз ddH 2 O и дважды PBS. Изображения лунок получали при 4-кратном увеличении на микроскопе EVOS FL.

    Для хондрогенной дифференцировки МСК высевали при концентрации 100 × 10 3 в 96-луночный планшет для тканевых культур и выращивали в хондрогенной среде при 37 ° C в течение 21 дня. Среду меняли на новую каждые 3 дня.Хондрогенез оценивали с помощью ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР). Клетки лизировали в Trizol (Thermo Fisher Scientific, США) в течение 10 мин при комнатной температуре. Выделение РНК с последующей обратной транскрипцией кДНК проводили согласно инструкциям производителя с помощью RNA Extraction Kit (Biosilica, Россия) и OT-1 Kit (Syntol, Россия) соответственно.

    Реакцию ОТ-ПЦР проводили в объеме 15 мкл с 1 нг / мкл кДНК на циклеере CFX96 Touch TM Real-Time PCR (Bio-Rad, США) с использованием смеси SYBR Green PCR Mix (Syntol, Россия).Условия цикла были 95 ° C в течение 4 минут 45 секунд, затем 40 циклов: 95 ° C в течение 30 секунд, 57 ° C в течение 45 секунд, 72 ° C в течение 15 секунд и окончательные 72 ° C в течение 10 минут. Праймеры были разработаны с помощью программного обеспечения NCBI Primer-BLAST. Их последовательности были следующими (5'– 3 '): ACAN, -F-GAGAACCGTCTACCTCTACCXXX, ACAN -R-TACCTCGGAAGCAGAAGG, 18S -F-CATTCGAACGTCTGCCCTTC, -GTCCC -GTCCC -GTCCC -GTCCC90. Кратность изменения экспрессии ACAN относительно необработанного контроля определяли относительно 18S рРНК с помощью ΔΔCT метода.

    Анализ жизнеспособности MTT

    МСК высевали в концентрации 3 × 10 3 клеток на лунку в 96-луночный планшет с плоским дном и выращивали в течение ночи при 37 ° C в стандартной среде. Через 24 ч среду в каждой лунке заменяли 200 мкл ВСМ. Необработанные контрольные клетки содержали в стандартной среде без FCS. После 72 ч инкубации в каждую лунку добавляли маточный раствор МТТ (MP Biomedicals, США) до конечной концентрации 1 мг / мл. После инкубации при 37 ° C в течение 3 ч среду с МТТ удаляли и лунки заполняли 100 мкл ДМСО.Планшеты инкубировали на шейкере при 37 ° C и 200 об / мин в течение 10 мин. Поглощение при 540–620 нм измеряли на Thermo iEMS Reader (Thermo Fisher Scientific, США) и корректировали путем вычитания фонового поглощения ДМСО из усредненных технических повторений. Коэффициент жизнеспособности МСК рассчитывали как поглощение образца, обработанного БЦМ, деленное на поглощение контрольного образца.

    Анализ жизнеспособности живых / мертвых клеток

    МСК высевали в концентрации 3 × 10 3 клеток на лунку в 96-луночный культуральный планшет с плоским дном и выращивали в течение ночи при 37 ° C в стандартной среде.Через 24 ч среду заменяли 200 мкл ВСМ на лунку. Необработанные контрольные клетки содержали в стандартной среде без FCS. После 72 ч инкубации среду заменяли 100 мкл раствора PBS, содержащего 2 капли / мл реагентов NucBlue Live и NucGreen Dead из набора Ready Probes Cell Viability Kit (Life Technologies, UK). Клетки инкубировали при 37 ° C в течение 15 мин и отображали на флуоресцентном микроскопе EVOS FL (Thermo Fisher Scientific, США) при 4-кратном увеличении с использованием фильтров DAPI / GFP. Процент мертвых клеток (зеленый) был рассчитан по отношению к общему количеству ядер клеток (синий) с использованием подключаемого модуля счетчика клеток в ImageJ Fiji1.51n программное обеспечение.

    Жизнеспособность МСК в костных блоках

    Костные блоки разморозили и поместили в 24-луночные планшеты. Перед посевом блоки после химической стерилизации кратковременно промывали 5 мл PBS. Всего 250 × 10 3 МСК в 100 мкл высевали на блоки с помощью наконечников для пипеток на 200 мкл. Образцы инкубировали при 37 ° C в течение 30 мин. Костные блоки без клеток служили отрицательным контролем. После этого в лунки залили 1,5 мл стандартной питательной среды.Костные блоки с МСК инкубировали 3 и 7 дней. В случае 7-дневной инкубации блоки переносили на третий день стерильными пинцетами в новый 24-луночный планшет, заполненный свежей стандартной средой. В конце периода инкубации в лунки добавляли маточный раствор МТТ до конечной концентрации 1 мг / мл. Планшеты выдерживали при 37 ° C в течение 3 ч. Костные блоки сушили на воздухе на бумажном фильтре в течение 15 мин. После этого их помещали в 24-луночный планшет с 1,5 мл ДМСО в каждой лунке. После инкубации в шейкере при 37 ° C и 200 об / мин в течение 10 мин 100 мкл полученного раствора переносили в 96-луночный планшет.Поглощение измеряли при 540–620 нм на Thermo iEMS Reader (Thermo Fisher Scientific, США).

    Статистика

    Все эксперименты были выполнены в биологических повторностях ( n ≥ 3). Данные показаны как средние значения со стандартным отклонением. Разницу между средними значениями экспериментальных групп оценивали с помощью GraphPad Prism 6.0 (США): односторонний ANOVA с тестом Tukey post hoc для анализа независимых концентраций белка и значений pH, повторные измерения, двусторонний ANOVA с Sidak . post hoc тест для анализа парных значений pH, двусторонний непарный тест Велча t -тест для всех сравнений жизнеспособности клеток с контрольной группой.Различия между средними считались значимыми, если значения P <0,05.

    Результаты

    Обязательство по линии MSC

    Через 14 дней роста МСК в остеогенной среде было обнаружено положительное окрашивание ARS, указывающее на отложение кальция (рис. 1а). На 21-й день хондрогенеза было 5-кратное увеличение экспрессии ACAN , что свидетельствует о продукции внеклеточного матрикса (рис. 1b).

    Рисунок 1

    Дифференциация МСК.( a ) ARS-окрашивание МСК, выращенных в остеогенной среде в течение 14 дней (справа) и необработанных клеток (слева). Все снимки были сделаны с 4-кратным увеличением. ( b ) Результаты ОТ-ПЦР: кратное изменение экспрессии ACAN в МСК, выращенных в хондрогенной среде в течение 21 дня, по сравнению с необработанными клетками

    Рисунок 1

    Дифференциация МСК. ( a ) ARS-окрашивание МСК, выращенных в остеогенной среде в течение 14 дней (справа) и необработанных клеток (слева).Все снимки были сделаны с 4-кратным увеличением. ( b ) Результаты ОТ-ПЦР: кратное изменение экспрессии ACAN в МСК, выращенных в хондрогенной среде в течение 21 дня, по сравнению с необработанными клетками

    Морфология стерилизованных костных блоков

    Сканирующая электронная микроскопия (SEM) костных блоков показала относительно плотную сеть стержневидных и пластинчатых трабекул во всех типах образцов. Поверхность трабекул в костных блоках после промывки и γ-облучения оказалась более чистой по сравнению с таковой, стерилизованной другими методами (рис.2e и f). Образцы после химической (рис. 2a и b) и термической стерилизации (рис. 2c и d) имели очевидное присутствие разрушенных компонентов костной ткани, покрывающих трабекулы и частично заполняющих межтрабекулярное пространство.

    Рисунок 2

    СЭМ костных блоков после обработки и стерилизации

    Рисунок 2

    СЭМ костных блоков после обработки и стерилизации

    Биохимические свойства BCM

    Полученные результаты представлены в таблице 1.Уровень белка в БКМ из костных аллотрансплантатов после термической стерилизации и γ-облучения был в ~ 4 раза ниже, чем в среде после химической стерилизации. Уровень pH BCM во всех образцах показал щелочное состояние. Наблюдался щелочной сдвиг pH в течение 24-часового инкубационного периода. Через 24 ч pH БЦМ после химической стерилизации был ниже по сравнению с термической стерилизацией и γ-облучением.

    Таблица 1

    Биохимические свойства BCM

    Тип BCM . pH
    .
    Концентрация белка (мкг / мл) .
    0 ч . 24 ч . P значение .
    Химическая промышленность 8,0 ± 0,11 8,2 ± 0,1 * <0,01 164 ± 20 *
    Тепловая 8,5 ± 0,04 8,6 ± 0,02 0.02 44 ​​± 23
    γ-облучение 8,4 ± 0,03 8,6 ± 0,02 <0,01 40 ± 16
    Контрольная среда 8,5 ± 0,04 8,9 ± 0,07 <0,0001 Н / Д
    Тип BCM . pH
    .
    Концентрация белка (мкг / мл) .
    0 ч . 24 ч . P значение .
    Химическая промышленность 8,0 ± 0,11 8,2 ± 0,1 * <0,01 164 ± 20 *
    Тепловая 8,5 ± 0,04 8,6 ± 0,02 0,02 44 ​​± 23
    γ-облучение 8,4 ± 0,03 8,6 ± 0,02 <0,01 40 ± 16
    Контрольная среда 8.5 ± 0,04 8,9 ± 0,07 <0,0001 НЕТ
    Таблица 1

    Биохимические свойства BCM

    Тип BCM . pH
    .
    Концентрация белка (мкг / мл) .
    0 ч . 24 ч . P значение .
    Химическая промышленность 8.0 ± 0,11 8,2 ± 0,1 * <0,01 164 ± 20 *
    Тепловой 8,5 ± 0,04 8,6 ± 0,02 0,02 44 ​​± 23
    γ-облучение 8,4 ± 0,03 8,6 ± 0,02 <0,01 40 ± 16
    Контрольная среда 8,5 ± 0,04 8,9 ± 0,07 <0,0001 Н / Д
    Тип BCM . pH
    .
    Концентрация белка (мкг / мл) .
    0 ч . 24 ч . P значение .
    Химическая промышленность 8,0 ± 0,11 8,2 ± 0,1 * <0,01 164 ± 20 *
    Тепловая 8,5 ± 0,04 8,6 ± 0,02 0.02 44 ​​± 23
    γ-облучение 8,4 ± 0,03 8,6 ± 0,02 <0,01 40 ± 16
    Контрольная среда 8,5 ± 0,04 8,9 ± 0,07 <0,0001 Н / Д

    Влияние BCM на жизнеспособность MSC

    Типичные изображения живого / мертвого флуоресцентного окрашивания МСК после 72-часового роста в тестируемом ВСМ показаны на рис.3а. Расчетная доля мертвых клеток изображена на рис. 3б. Доля мертвых МСК, выращенных в контрольном BCM, составила 1,1 ± 0,7%, тогда как в химическом BCM - 100,0%. В то же время доли мертвых МСК, культивированных в БКМ из костных блоков после термической стерилизации и γ-облучения, составили 11,5 ± 2,3% и 14,8 ± 3,7% соответственно.

    Рисунок 3

    Результаты анализа жизнеспособности МСК с ВСМ. ( a ) Типичные изображения флуоресцентной микроскопии MSC после воздействия BCM в течение 72 часов с ( b ) расчетным процентом мертвых клеток.Все снимки были сделаны с 4-кратным увеличением. ( c ) Анализ МТТ: отношение жизнеспособности МСК, нормализованное к контролю после 72-часового культивирования с различными типами ВСМ

    Рисунок 3

    Результаты анализа жизнеспособности МСК с ВСМ. ( a ) Типичные изображения флуоресцентной микроскопии MSC после воздействия BCM в течение 72 часов с ( b ) расчетным процентом мертвых клеток. Все снимки были сделаны с 4-кратным увеличением. ( c ) Анализ МТТ: отношение жизнеспособности МСК, нормализованное к контролю после 72-часового культивирования с различными типами ВСМ

    Результаты анализа МТТ для МСК, выращенных в ВСМ в течение 72 часов, показаны на рис.3c. Среднее соотношение жизнеспособности МСК, культивируемых в БКМ после химической стерилизации, составляло 0,12 ± 0,02, тогда как в случае БКМ после термической стерилизации и γ-облучения оно составляло 1,07 ± 0,02 и 1,02 ± 0,02 соответственно.

    Жизнеспособность МСК после роста костных блоков

    Результаты теста МТТ показали сравнимую абсорбцию формазана после роста МСК в костных блоках. Значения оптической плотности для термической стерилизации и γ-облучения составляли 0,352 ± 0,022 и 0,363 ± 0.116 через 3 дня, 0,601 ± 0,116 и 0,497 ± 0,207 через 7 дней соответственно (рис. 4).

    Рисунок 4

    Результаты анализа МТТ для МСК, выращенных в костных блоках в течение 3 и 7 дней

    Рисунок 4

    Результаты анализа МТТ для МСК, выращенных в костных блоках в течение 3 и 7 дней

    Обсуждение

    Хотя кость аллотрансплантата представляет собой многообещающую альтернативу аутотрансплантату, ей не хватает основных качеств остеоиндуктивности и остеогенеза.Большинство методов обработки и стерилизации кости не только ухудшают остеокондуктивность костных аллотрансплантатов, но и ухудшают их биосовместимость. Это препятствует возможности усиления остеоинтеграции костных аллотрансплантатов за счет их обогащения проостеогенными клетками-предшественниками, такими как МСК.

    Наше исследование было сосредоточено на изменении морфологических, биохимических и биологических свойств костных аллотрансплантатов, полученных тремя различными методами обработки. Основная цель всех трех методов - снижение бионагрузки.Это достигается либо смесью антибиотиков с химическими стерилизаторами, либо воздействием температуры не менее 82,5 ° C в течение 15 минут, либо гамма-облучением дозой 25 кГр, которое вредно для патогенов. Кроме того, эти методы помогают сохранить собранную кость для длительного хранения. Обширная циклическая промывка костных трансплантатов в сочетании с γ-облучением позволяет добиться снижения бионагрузки с дополнительным преимуществом удаления белков, липидов и клеточного мусора [25].

    Костные трансплантаты несут множество белков, которые регулируют процесс остеоинтеграции через паракринные механизмы [26].Peng et al. [27] показали, что BCM из свиных костных чипов ингибирует остеогенез линии стромальных клеток мыши ST2 посредством активации сигнального пути ERK ниже рецептора TGF-β. Таким образом, присутствие эндогенных белков может усложнить стандартизацию протоколов усиления костного трансплантата факторами роста и отрицательно повлиять на дифференцировку клеток-предшественников. Принимая это во внимание, мы проанализировали концентрацию белков в БЦМ, которая была ожидаемо ниже после циклической отмывки с γ-облучением по сравнению с методом химической обработки.Стерилизация костных блоков теплом также снизила содержание белка BCM в той же степени, что и промывание (таблица 1). Кроме того, СЭМ выявила наличие остатков ткани только в костных блоках, обработанных химическим и термическим методом (рис. 2a – d), что подтверждает эффективность удаления компонентов костного мозга с помощью процедуры промывки (рис. 2e и f).

    Мы дополнительно оценили влияние BCM на метаболизм МСК. Учитывая общее понимание того, что результаты анализа МТТ не соответствуют напрямую количеству жизнеспособных клеток, мы также оценили процент мертвых клеток при флуоресцентном окрашивании живых / мертвых.Экстракт из химически стерилизованной кости заметно снизил метаболическую активность клеток и сделал 100% из них мертвыми, что продемонстрировало окрашивание. Хотя это подтверждает ранее сообщенное снижение жизнеспособности МСК из свежезамороженной кости за счет БКМ [28], мы полагаем, что следы химических стерилизаторов, таких как бромид натрия, этанол или ДМСО, а не компоненты костного мозга, были ответственны за гибель клеток. Несмотря на стимуляцию жизнеспособности клеток BCM после отмывки γ-облучением, продемонстрированную в том же отчете, мы не наблюдали каких-либо значительных изменений метаболической активности MSC с помощью этого метода в отличие от необработанных клеток.Напротив, инкубация МСК в ВСМ из стерилизованной нагреванием кости приводила к небольшому увеличению клеточного метаболизма, тогда как процент мертвых клеток был аналогичен таковому в экстракте от промывки с γ-облучением. Это указывает на возможную активацию процесса дифференцировки МСК. Фактически, Caballé-Serrano et al. [29] показали, что свиной БЦМ, предварительно нагретый в течение 10 мин при 85 ° C, усиливает остеокластогенез в клетках костного мозга мышей. Авторы предположили, что активация факторов роста или инактивация ингибиторов запускает клетки.Кроме того, анализ МСК, засеянных на костные блоки, не выявил каких-либо существенных различий в метаболической активности клеток между термической стерилизацией и отмывкой с помощью γ-облучения. Ранее Endres et al. [30] сообщил о значительном снижении процента жизнеспособных мононуклеарных клеток после 28-дневного роста в костных дисках, стерилизованных γ-облучением 25 кГр. Учитывая, что протокол промывки, использованный в этом исследовании, был менее интенсивным, чем при приготовлении костных трансплантатов, γ-облучение, скорее всего, привело к перекисному окислению липидов с образованием свободных радикалов, токсичных для клеток [31].

    Сообщалось, что чрезмерное защелачивание локальной клеточной среды снижает жизнеспособность МСК (pH> 8,27) и ингибирует их способность дифференцироваться в направлении остеогенного происхождения (pH> 7,9) [32]. Мы оценили pH BCM из костных блоков и обнаружили, что он находится в щелочном состоянии (Таблица 1). Уровни pH экстрагированной среды находились в пределах 8,2–8,6, в то время как химическая стерилизация привела к самому низкому pH (8,2). Собирая вместе наши данные о жизнеспособности МСК, тот факт, что мы измерили pH кондиционированной среды после 24 часов инкубации без клеток, и щелочное состояние контрольной среды, мы не можем подтвердить ранее сообщенное влияние щелочного pH на метаболизм МСК.Следует также отметить, что предлагаемые пороговые значения pH (7,9 и 8,27) были взяты из исследования, посвященного неорганическому материалу для замены кости, который, в отличие от натуральной кости, обычно выделяет химические соединения в течение более длительного периода времени.

    Хотя из наших данных очевидно, что циклическая промывка с гамма-облучением должна быть предпочтительным способом производства костного каркаса для приложений тканевой инженерии, выбор протокола обработки и стерилизации костного трансплантата должен основываться на потребностях в клинической ситуации. .Например, термическая стерилизация будет полезна в сценариях, когда требуется большое количество костного материала за короткий период времени. Циклическое промывание кости со стерилизацией γ-облучением было бы предпочтительным в случае восстановления дефекта кости критического размера, когда предпочтительна доставка каркаса со стандартизованной дозой МСК или проостеогенных факторов роста. Кроме того, следует учитывать способность медицинского учреждения размещать и обслуживать специализированное оборудование (например, аппараты для облучения, низкотемпературные морозильные камеры).Хотя метод химической стерилизации не подходит для применения в тканевой инженерии, он может быть рентабельной альтернативой более сложным процедурам.

    Мы признаем следующие ограничения нашего исследования: (i) это была доклиническая оценка in vitro костных трансплантатов человека и МСК крыс, таким образом, использование клеток разных видов могло отрицательно повлиять на воспроизводимость данные дальнейших исследований с человеческими клетками; (ii) полученные результаты показали активность in vitro МСК, которая не обязательно будет такой же после их доставки на костные трансплантаты в живой организм; (iii) ожидается небольшая вариабельность объема испытуемого блока из-за использования ручной пилы; (iv) поскольку инструкции производителя по термической стерилизации действительны только для цельных головок бедренной кости, мы сообщаем о воздействии не менее 82.5 ° C, поскольку нам не удалось определить фактическую температуру внутри костных блоков.

    Выводы

    Мы показали, что термическая стерилизация и отмывка с последующим γ-облучением не оказывают значительного влияния на цитосовместимость костных трансплантатов человека с МСК, тогда как химическая стерилизация заметно снижает ее. Циклическая промывка со стерилизацией с помощью γ-облучения представляет собой эффективный метод обработки собранной кости человека, поскольку он удаляет как бионагрузку, так и компоненты костного мозга.Использование чистого костного материала благоприятно для производства стандартизированных каркасов для тканевой инженерии.

    Необходимо дальнейшее совершенствование технологий обработки костного трансплантата и оценка полученного материала на предмет его механической стабильности, а также совместимости с человеческими МСК in vitro, и , in vivo, .

    Финансирование

    Работа поддержана Министерством здравоохранения Российской Федерации [грант № 115030510010].

    Заявление о конфликте интересов . Ничего не объявлено.

    Список литературы

    1

    Flierl

    MA

    ,

    Smith

    WR

    ,

    Mauffrey

    C

    et al.

    Исходы и частота осложнений различных методов костной пластики при несращениях переломов длинных костей: ретроспективное когортное исследование с участием 182 пациентов

    .

    J Orthop Surg Res

    2013

    ;

    8

    :

    33.

    2

    Bostrom

    MPG

    ,

    Seigerman

    DA.

    Клиническое использование аллотрансплантатов, деминерализованных костных матриц, синтетических заменителей костных трансплантатов и остеоиндуктивных факторов роста: обзорное исследование

    .

    HSS J

    2005

    ;

    1

    :

    9

    -

    18

    .3

    Kuchinad

    RA

    ,

    Garbedian

    S

    ,

    Rogers

    BA

    et al.

    Применение структурного аллотрансплантата при первичном и ревизионном эндопротезировании коленного сустава с потерей костной массы

    .

    Adv Orthop

    2011

    ;

    2011

    :

    578952.

    4

    Pape

    HC

    ,

    Evans

    A

    ,

    Kobbe

    P.

    Аутологический костный трансплантат: свойства и методы

    .

    J Orthop Trauma

    2010

    ;

    24

    :

    S36

    -

    40

    .5

    Dimitriou

    R

    ,

    Mataliotakis

    GI

    ,

    Angoules

    AG

    et al.

    Осложнения после взятия аутологичного костного трансплантата из гребня подвздошной кости и с использованием РИА: систематический обзор

    .

    Травма

    2011

    ;

    42

    :

    S3

    -

    15

    ,6

    Hass

    R

    ,

    Kasper

    C

    ,

    Böhm

    S

    et al.

    Различные популяции и источники мезенхимальных стволовых клеток человека (MSC): сравнение MSC

    , полученных из тканей взрослых и новорожденных.

    Сигнал сотовой связи

    2011

    ;

    9

    :

    12.

    7

    Zomorodian

    E

    ,

    Baghaban Eslaminejad

    M.

    Мезенхимальные стволовые клетки как мощный источник клеток для регенерации костей

    .

    Stem Cells Int

    2012

    ;

    2012

    :

    1

    -

    9

    ,8

    Long

    T

    ,

    Zhu

    Z

    ,

    Awad

    HA

    et al.

    Влияние листов мезенхимальных стволовых клеток на заживление структурного аллотрансплантата дефектов бедренной кости критического размера у мышей.

    Биоматериалы

    2014

    ;

    35

    :

    2752

    -

    9

    ,9

    Shao

    J

    ,

    Zhang

    W

    ,

    Yang

    T.

    Использование мезенхимальных стволовых клеток в качестве терапии для регенерации и восстановления костей

    .

    Biol Res

    2015

    ;

    48

    :

    1

    -

    7

    .10

    Chen

    L

    ,

    Tredget

    EE

    ,

    Wu

    PYG

    et al.

    Паракринные факторы мезенхимальных стволовых клеток привлекают макрофаги и клетки эндотелиального происхождения и улучшают заживление ран

    .

    PLoS One

    2008

    ;

    3

    :

    e1886

    -

    12

    .11

    Furuta

    T

    ,

    Miyaki

    S

    ,

    Ishitobi

    H

    et al.

    Экзосомы, полученные из мезенхимальных стволовых клеток, способствуют заживлению переломов у мышей модели

    .

    Stem Cells Transl Med

    2016

    ;

    5

    :

    1620

    -

    30

    .12

    Voor

    MJ

    ,

    Madsen

    R

    ,

    Malkani

    A

    et al.

    Импакционная пластика для ревизии бедренного компонента на модели козы с использованием промытого морселизованного губчатого аллотрансплантата

    .

    Ортопедия

    2008

    ;

    31

    :

    1.

    13

    Bonsignore

    LA

    ,

    Anderson

    JR

    ,

    Lee

    Z

    et al.

    Прилипший липополисахарид подавляет остеоинтеграцию ортопедических имплантатов, нарушая дифференцировку остеобластов

    .

    Кость

    2013

    ;

    52

    :

    93

    -

    101

    .14

    Ломас

    R

    ,

    Драммонд

    O

    ,

    Kearney

    JN.

    Обработка целых аллотрансплантатов головки бедренной кости: метод повышения клинической эффективности и безопасности

    .

    Банк клеточных тканей

    2000

    ;

    1

    :

    193

    -

    200

    0,15

    Йейтс

    P

    ,

    Thomson

    J

    ,

    Galea

    г.

    Обработка целых аллотрансплантатов головки бедренной кости: методика валидации для надежного удаления ядерных клеток, липидов и растворимых белков с использованием многоступенчатой ​​процедуры промывки

    .

    Банк клеточных тканей

    2005

    ;

    6

    :

    277

    -

    85

    .16

    Eagle

    MJ

    ,

    Man

    J

    ,

    Rooney

    P

    et al.

    Оценка закрытой промывочной системы, разработанной для обработки головок бедренной кости живых доноров

    .

    Банк клеточных тканей

    2017

    ;

    18

    :

    1

    -

    8

    ,17

    Fillingham

    Y

    ,

    Jacobs

    J.

    Костные трансплантаты и их заменители

    .

    Костный сустав J

    2016

    ;

    98 – B

    :

    6

    9

    .18

    Робертс

    TT

    ,

    Розенбаум

    AJ

    ,

    Робертс

    TT

    и др.

    Костные трансплантаты, костные заменители и ортобиологические костные трансплантаты, костные заменители и ортобиология мост между фундаментальной наукой и клиническими достижениями в области заживления переломов

    .

    2016

    ;

    6278

    :

    114

    -

    24

    ,19

    Куриен

    T

    ,

    Pearson

    RG

    ,

    Scammell

    BE.

    Заменители костного трансплантата, имеющиеся в настоящее время в ортопедической практике: доказательства их использования

    .

    Костный сустав J

    2013

    ;

    95-B

    :

    583

    -

    97

    ,20

    Зеебах

    C

    ,

    Schultheiss

    J

    ,

    Wilhelm

    K

    et al.

    Сравнение шести заменителей костного трансплантата в отношении эффективности посева клеток, метаболизма и поведения роста мезенхимальных стволовых клеток (МСК) человека in vitro

    .

    Травма

    2010

    ;

    41

    :

    731

    -

    8

    ,21

    Campana

    V

    ,

    Milano

    G

    ,

    Pagano

    E

    et al.

    Костные заменители в ортопедической хирургии: от фундаментальной науки к клинической практике

    .

    J Mater Sci Mater Med

    2014

    ;

    25

    :

    2445

    -

    61

    .22

    Hing

    KA

    ,

    Wilson

    LF

    ,

    Buckland

    T.

    Сравнительные характеристики трех керамических заменителей костных трансплантатов

    .

    Spine J

    2007

    ;

    7

    :

    475

    -

    90

    .23

    Hannink

    G

    ,

    Arts

    JJC.

    Биорезорбируемость, пористость и механическая прочность костных заменителей: что оптимально для регенерации кости?

    Травма

    2011

    ;

    42

    :

    S22

    -

    5

    .24

    Pruss

    A

    ,

    Seibold

    M

    ,

    Benedix

    F

    et al.

    Валидация «системы банка кости Марбург» для термодезинфекции аллогенных трансплантатов головки бедренной кости с использованием отобранных бактерий, грибов и спор

    .

    Биологические препараты

    2003

    ;

    31

    :

    287

    -

    94

    ,25

    Игл

    MJ

    ,

    Man

    J

    ,

    Руни

    P

    и др.

    Оценка улучшенного протокола промывки кости для кости человека умершего донора

    .

    Банк клеточных тканей

    2015

    ;

    16

    :

    83

    -

    90

    .26

    Caballe-Serrano

    J

    ,

    Bosshardt

    D

    ,

    Buser

    D

    et al.

    Протеомный анализ среды, кондиционированной костью свиньи

    .

    Int J Oral Maxillofac Implants

    2014

    ;

    29

    :

    1208

    -

    15

    .27

    Peng

    J

    ,

    Nemec

    M

    ,

    Brolese

    E

    et al.

    Костно-кондиционированная среда подавляет остеогенную и адипогенную дифференцировку мезенхимальных клеток in vitro

    .

    Clin Implant Dent Relat Res

    2015

    ;

    17

    :

    938

    -

    49

    ,28

    Smith

    CA

    ,

    Richardson

    SM

    ,

    Eagle

    MJ

    et al.

    Использование нового процесса промывки костного аллотрансплантата для создания биосовместимого, механически стабильного и остеоиндуктивного биологического каркаса для использования в инженерии костной ткани

    .

    J Tissue Eng Regen Med

    2015

    ;

    9

    :

    595

    -

    604

    ,29

    Caballé-Serrano

    J

    ,

    Schuldt Filho

    G

    ,

    Bosshardt

    DD

    et al.

    Кондиционированная среда из свежей и деминерализованной кости усиливает остеокластогенез в культурах костного мозга мышей

    .

    Clin Oral Implants Res

    2016

    ;

    27

    :

    226

    -

    32

    .30

    Endres

    S

    ,

    Kratz

    M

    ,

    Heinz

    M

    et al.

    Тестирование биосовместимости различных стерилизованных или продезинфицированных аллогенных костных трансплантатов по сравнению с золотым стандартом аутологичных костных трансплантатов - анализ иммуномодуляции in vitro

    .

    Z Orthop Ihre Grenzgeb

    2005

    ;

    143

    :

    660

    -

    8

    .31

    Moreau

    MF

    ,

    Gallois

    Y

    ,

    Baslé

    MF

    et al.

    Гамма-облучение костных аллотрансплантатов человека изменяет мозговые липиды и высвобождает токсичные соединения для остеобластоподобных клеток

    .

    Биоматериалы

    2000

    ;

    21

    :

    369

    -

    76

    .32

    Monfoulet

    L-E

    ,

    Becquart

    P

    ,

    Marchat

    D

    et al.

    pH в микроокружении мезенхимальных стволовых клеток человека является критическим фактором для оптимального остеогенеза в ткане-инженерных конструкциях

    .

    Tissue Eng Part A

    2014

    ;

    20

    :

    1827

    -

    40

    .

    © Автор (ы) 2018. Опубликовано Oxford University Press.

    Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http: // creativecommons.org / licenses / by / 4.0 /), который разрешает неограниченное повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

    Имя Лабутин Значение? Что означает Лабутин

    Значение имени Лабутин и анализ личности. Лишь немногие знают истинную сущность своих имен. Откройте для себя скрытый смысл ваших имен. Фигура знания и любопытства. Важно открывать и понимать то, что вас окружает. Вы прирожденный следователь, у которого внутри есть настоящая движущая сила!

    Всегда делая шаг назад, вы любите измерять, взвешивать, исследовать и разгадывать события или людей, которые вас окружают.Иногда забывая быть открытым или спонтанным, вы далеко не асоциальны!

    Итог?

    Спокойный и терпеливый, вы всегда двигаетесь в своем собственном темпе, не принимая во внимание критику или общую логику. Дальновидный человек, способный творить чудеса, если он начинает доверять своей интуиции. Люблю путешествия и всевозможные приключения.
    Церебральный, чувствительный, духовный и интеллектуальный, вы чувствуете себя комфортно во многих сферах.

    Лабутин означает связанный с работой

    Ваш стиль работы четко структурирован и никогда не делает ничего случайного.

    Вдумчивое и требовательное чувство необходимости контролировать сектор деятельности, в котором вы развиваетесь. Вы очень хорошо выполняете задачи, умеете работать на высоком уровне, делая что-то в одиночку, но вы также можете очень хорошо вписаться в команду. Неприязнь к рутине - работа, которая движется и меняется, лучше подходит для ваших навыков.

    Подходящие профессии: деятельность в области права, юстиции, нотариусов, науки, экономики, информатики, биологии, ремесел, издательского дела, письма, истории, учителя, образования, времени в пути, искусства, психологии, астрологии или нумерологии.

    Что значит хорошее самочувствие для Лабутина?

    Довольно динамичный, предприимчивый и сильный, но ему трудно управлять своей энергией.

    Что может помешать вам двигаться вперед. Таким образом, научитесь развиваться в сбалансированном контексте, иначе вы можете быстро исчерпать энергию. Ваши слабые места: почки, поясница, нос, ноги, ваша гиперчувствительность, кровообращение.

    Лабутин имеет значение на финансовом уровне

    По натуре осторожен и тревожен, внимательно следит за своими расходами, всегда держит их под контролем.

    Более того, вы часто прилагаете довольно жесткую линию политики, которая позволяет поддерживать хороший баланс, несмотря на взлеты и падения.

    ЛАБУТИН - Значение фамилии, характеристики фамилии, нумерология, основные характеристики и объяснение фамилии

    Узнайте тайну фамилии LABUTIN глядя на результаты вычислений в нумерологической магии чисел. Вы познаете скрытые таланты и желания. Возможно, вы этого не понимаете, но чувствуете, что вам нужно больше узнать о себе и своих близких.

    Первая буква L фамилии ЛАБУТИН может сказать о характере ее владельца

    Все, чьи родители назвали имена, начинающиеся с этой буквы, любят переменчивость. Вы общительны, интересны, но если не полюбите, можете склонить к пьянству или чревоугодию. Когда все идет хорошо, вы становитесь для своего партнера путешествием в неизвестность.

    Основные черты фамилии ЛАБУТИН

    • мощность
    • комфорт
    • сила
    • постоянство
    • напористость
    • способность к большим чувствам
    • впечатлительность
    • миролюбие
    • тонкая одухотворенность
    • артистичность
    • большая изобретательность
    • логика
    • мелочность
    • поиск идеала
    • чуткая творческая личность
    • щедрое сочувствие
    • интуиция
    • робость
    • уязвимость
    • бескомпромиссность
    • развитое чувство юмора
    • ревность

    ЛАБУТИН: число выражения «7»

    Люди под влиянием числа «семь» реже других понимаются людьми правильно.Их часто считают высокомерными снобами, которые не склонны к общению и мало с кем общаются, но это совсем не так; так только в кругу незнакомых людей. Итак, «семерка» - это вовсе не мрачный бук, который только ждет, пока другие сделают ошибку или выставят себя в нелепом свете; на самом деле он наделен любовью к миру и всем его представителям, а также душой неутомимого искателя, любопытство которого безгранично.

    «Семерки» сами выбирают, с кем общаться, и обычно предпочитают одиночество скучному обществу или пустым разговорам, но они чутко прислушиваются к словам каждого в надежде найти разумное зерно.Склонен к переменам и непостоянству - «семеро» лучше других понимает, что нельзя дважды войти в одну и ту же реку, но считает, что люди меняются к лучшему, и всегда готов дать второй, а то и третий шанс. . Саморазвитие - неотъемлемый атрибут жизни «Семерок», и чтобы не стоять на месте, им нужна свобода и отсутствие ограничений, в том числе внутренних. Именно поэтому, взрослея, они сначала пробуют то, что запрещено родителями, ведут себя не так, как их учили, и, освободившись от опеки, начинают формировать собственную личность.

    Заслужить благосклонность «семерки» несложно, ведь обычно такой человек щедр на эмоции, но долго сохранять его привязанность практически невозможно. Это возможно только тем, кто готов работать над собой, не раскрывать себя до конца, ускользать и прятаться. От того, в ком нет непредсказуемости и загадки, «семерка» быстро надоест.

    Личная жизнь «Семерки» складывается непросто. «Семерки» часто стремятся к недостижимому и обычно это хорошо знают.В своей борьбе, даже если они обречены на поражение, они получают бесценный опыт, необходимый для продвижения вперед. Эти люди имеют сильную склонность к философии и метафизике; часто именно знание оккультных наук помогает им не унывать.

    ЛАБУТИН: Число душевного побуждения «9»

    Категория людей, чье число умственных устремлений равно «девяти», характеризуется неуравновешенностью и непоследовательностью. Их главное желание - улучшить качество жизни (как своей, так и чужой), которое они пытаются реализовать только в соответствии со своими представлениями.Природа наделила «Девяток» непреодолимым чувством ответственности и высокими требованиями к окружающим, и только привязанность к близким делает их снисходительными.

    Несмотря на то, что «девятки» достаточно амбициозны, чрезмерная задумчивость и недостаток жизненной энергии не позволяют им достигать больших высот. Неудачи могут превратить таких людей в сварливых и озлобленных неудачников во всем мире, но чаще всего «девятка» философски воспринимает поражение и продолжает искать новые пути развития.

    «Девятка» манит все прекрасное. Отличающиеся обостренным чувством гармонии, такие люди всегда выделяются «из толпы»: экстравагантные наряды, необычные занятия, артистизм. Они нуждаются во всеобщем внимании как воздух, а чувство никчемности вызывает горькое негодование. Мечта «девяток» - сделать счастливыми всех окружающих.

    Но часто - у этих людей ничего не получается, потому что они не хотят вдаваться в подробности выяснения сущности счастья для конкретного человека, и поэтому либо ничего не делают, либо делают что-то не так, не желая впоследствии признавать свои ошибки.

    «Девятки» постоянно живут в мире иллюзий, которые они лелеют. В то же время столкновение с наихудшими проявлениями действительности для них является серьезным стрессом, вызывающим страдания и даже депрессию. В зрелом возрасте «девятки» легкомысленны, непрактичны, непригодны для жизни и юношеского идеализма.

    Между тем, иногда им все же присущи здравомыслие и рассудительность. В семейной и уютной обстановке «девятки» расслабляются, становятся очаровательными и милыми собеседниками.Их личная жизнь очень насыщена, полна глубоких эмоций. Благодаря тому, что «девятки» могут тонко чувствовать чужие желания, а также создавать гармоничный ансамбль «внутреннего» и «внешнего», они часто становятся талантливыми дизайнерами.

    ЛАБУТИН: Личностное число «5»

    Если человек находится под влиянием «пятерки», то он надолго остается взрослым ребенком. Даже в солидном возрасте такие люди ведут себя как бунтовщики-подростки. Такой человек готов рискнуть всем ради пустяка.Обдумывать и планировать последствия своих решений - не для них. Иногда протест таких лиц направлен против общепринятых правил и выглядит довольно нелепо.

    В целом можно сказать, что это своеобразное развлечение. Придумывать врагов и бороться с ними - вот главное развлечение для «пятерки». Стабильная, спокойная жизнь вызывает у него тоску, неудовлетворенность и стремление к переменам.

    Интересно, что даже если в жизни такого человека временно не наблюдается такой борьбы, он сам тянется к драмам и трагедиям.Ему это не только интересно, но и подпитывает его жизненные силы. Страдания и мрачные истории вызывают у него любопытство. А это может привести к глупым действиям и фатальным ошибкам. Но «пятерка» просто не способна преодолеть это влечение. Он хочет познать этот мир досконально и со всех сторон.

    Часто во всем виновата слишком яркая фантазия и самоуверенность. Обладая таким набором качеств, они редко становятся хорошими супругами, надежными деловыми партнерами. Ведь будущее их совершенно не беспокоит.На значительные покупки никогда не соберутся - лучше взять кредит. Они также не в состоянии планировать свою жизнь - в любой момент может оборваться поездка.

    При этом они верят, что судьба их благосклонна и если вдруг случится серьезная беда, они смогут мобилизовать все свои силы. таланты и все решится наилучшим образом. Даже если они уже ошибались, это их ничему не учит. Они редко делают выводы из ситуации.Именно этого умения им не хватает больше всего.

    Чего нельзя отнять у людей под знаком пятерки, так это эрудиции. Они могут рассказать обо всем на свете - увлекательно и эмоционально. Их всегда будут слушать с удовольствием. Если у такого человека есть хобби, он постарается извлечь из этого пользу. В целом можно сказать, что эти люди всегда на передовой.

    Туда, куда более осторожные никогда не пойдут, «пятерки» с радостью последуют за ними. А для таких приключений всегда нужно быть в хорошей физической форме, поэтому они любят спорт, следят за своим питанием и часто остаются стройными и подтянутыми до глубокой старости.

    Болезни и однообразная жизнь загоняют таких людей в депрессию, из которой им нелегко выйти.

    Подвальный пол | Какие типы использовать для всех сценариев

    Если вы изучаете варианты пола в подвале, вы можете быть немного ошеломлены. В конце концов, есть тысячи вариантов, от дешевых до астрономических. Но не волнуйтесь - наше руководство разбивает лучшие типы.


    Заявление об отказе от ответственности: Информация, включенная в этот пост, предназначена только для информационных целей и не должна восприниматься как юридическая, финансовая или самостоятельная консультация.Мы настоятельно рекомендуем проконсультироваться со специалистом, прежде чем пытаться делать какие-либо улучшения или ремонт дома своими руками.


    Перейти к:

    Покупка полов подвала?

    Alyona Tec / Shutterstock

    Делаете ли вы ремонт в своем доме или переезжаете в новый, вам нужно будет воспользоваться преимуществами своего подвального помещения. Ключевой фактор, о котором следует помнить, - это то, какой пол положить в подвал.

    Подвалы могут многое предложить - от дополнительного уровня безопасности в вашем доме до помещения, которое вы можете сдать в аренду за дополнительные деньги.Хотя они могут быть очень гибкими пространствами, они также должны учитывать некоторые уникальные факторы.

    Итак, сегодня мы рассмотрим некоторые из лучших вариантов подвальных полов, которые окажутся прочными и практичными, но все равно будут выглядеть стильно и классически на долгие годы.

    Прежде чем выбрать напольное покрытие, подумайте о своем бюджете и степени заинтересованности. Краска, эпоксидная смола или плитка - отличные варианты, если вы собираетесь сохранить простоту, в то время как виниловые доски или инженерная древесина рекомендуются, если вы хотите немного поработать на цокольном этаже.

    Раньше я управлял инвестиционной недвижимостью, поэтому можете поспорить, что я видел все возможные варианты. И, потратив сотни тысяч долларов на замену подвального пола клиентов, я кое-что узнал о том, что работает, а что нет.

    Перед началом работы

    Ungvar / Shutterstock

    Прежде чем вы начнете выбирать напольное покрытие, вам нужно обратить пристальное внимание на бетон под ним. Этот бетон, вероятно, был там с тех пор, как был построен ваш дом, и если с тех пор на него никто не обращал внимания, ему понадобится ремонт.

    Перед укладкой нового пола внимательно осмотрите этот бетонный слой. Обращайте внимание на грубые или неровные поверхности в бетоне, трещины (те, в которые вы можете уместить десять центов) и возможные смещения.

    Решение этих проблем необходимо перед установкой нового пола по нескольким причинам. Во-первых, подвалы известны тем, что они влажные и затхлые, и эти проблемы могут усугубляться, когда целостность бетона нарушается, что приводит к проникновению большего количества влаги. Это может даже привести к чрезмерному проникновению воды во время влажной погоды, что приведет к затоплению.

    Критически важно начинать с прочного фундамента. Если в этой части пола есть неровности, они будут видны на новом напольном покрытии. Скорее всего, у вас возникнут проблемы с укладкой нового напольного покрытия на неровную поверхность, и, независимо от используемого материала, со временем он прогнется и покоробится.

    Вот почему так важно, чтобы вы проверили цементный пол на предмет дефектов или, еще лучше, пригласили инспектора и убедились, что вы начинаете с прочного фундамента при укладке нового цокольного пола.

    Важные соображения

    Labutin Art / Shutterstock

    Поскольку существует множество вариантов напольного покрытия для вашего подвала, важно учитывать эстетический вид, который вам нужен, поскольку это сильно повлияет на ваш окончательный выбор. Подумайте, для чего будет использовано пространство.

    Поскольку подвал может иметь очень много применений, вы можете планировать использовать его как многоцелевое пространство. Так что подумайте о том, какой эффект вы хотите, чтобы это пространство имело. Вы хотите, чтобы он был уютным и уютным, или вы предпочли бы, чтобы он был чистым, минималистичным и голым?

    Нет неправильного ответа, но заблаговременное решение поможет вам сузить круг вариантов и выбрать материал, который будет соответствовать вашему стилю и даст вам удобное и хорошо интегрированное пространство.

    Вы также захотите окончательно уточнить свой бюджет, прежде чем выбирать стиль напольного покрытия. Из-за цемента ваш пол будет выглядеть холодным и непривлекательным, если вы не сделаете поверх него черный пол. Фактически, многие типы полов требуют установки чернового пола.

    Черновой пол создает гладкую и ровную поверхность и производит привлекательный эффект, аналогичный полам основного уровня. Важно помнить, что установка чернового пола сокращает ваш бюджет, оставляя меньше материалов для напольного покрытия.

    Лучшие типы полов в подвалах

    Независимо от того, решите ли вы установить черновой пол, чтобы создать теплую атмосферу, или предпочитаете использовать свой подвал в качестве мастерской, существует множество вариантов полов, которые подойдут для подвального помещения и помогут вам максимально использовать пространство.

    1. Варианты, для которых не требуется черный пол

    Если вы не хотите укладывать черновой пол, есть несколько недорогих вариантов. Вы или профессионал можете установить эти базовые опции быстро и легко, оставив вам беспроблемный цокольный этаж без лишних хлопот.

    Краска
    Sidorov_ruslan / Shutterstock

    Краска - один из самых простых и базовых вариантов настила подвала. Несмотря на то, что он оставит более холодный оттенок, это все же отличный и недорогой вариант, чтобы добавить немного стиля и индивидуальности вашему подвалу.

    Если вы планируете использовать свой подвал как тренировочную площадку или место для хранения вещей, то окрашенный пол покроет все ваши основания и потребности. Выберите краску, специально предназначенную для цементных полов, и освойте правильную технику подготовки поверхности, нанесения и отверждения.

    Этот процесс достаточно прост для самостоятельного проекта на выходные, а стоимость невысока - около 10 долларов за квадратный фут.

    эпоксидная
    Doralin Samuel Tunas / Shutterstock

    Если вам все еще нужно базовое решение для подвального этажа, но что-то с немного большей отделкой, чем краска, тогда эпоксидная смола - отличная альтернатива. Они часто используются в гаражах и мастерских и придают конечному продукту гладкий, вощеный вид.

    Наш лучший выбор

    Есть много вариантов для разных стилей эпоксидной смолы; вы можете получить его в разных цветах, а в конце процесса можно добавить элементы для текстуры.В любом случае, эпоксидную смолу легко содержать в чистоте и порядке, и она по-прежнему экономична, примерно за 120 долларов за комплект для сборки DIY.

    2. Варианты, которые работают с черным полом или без него

    Если вы сомневаетесь в установке чернового пола, но хотите продолжить свой проект, не волнуйтесь. Можно использовать несколько вариантов напольного покрытия с черновым полом или без него, хотя каждый метод укладки имеет свои плюсы и минусы.

    Плитка
    Александр Звейгер / Shutterstock

    Мир плитки довольно обширен; К счастью, в подвале можно использовать несколько типов полов, как с черновым полом, так и без него.Плитка привлекательна тем, что ее легко укладывать, так как ее можно укладывать отдельными частями. Это также упрощает ремонт, если в ремонте нуждается только одна плитка.

    Можно использовать резину, винил или керамическую плитку, но резина и винил - лучший выбор для подвалов без чернового пола. Их гибкая поверхность может снизить твердость бетона под ней и может быть щадящим материалом для любых неровностей поверхности.

    Когда дело доходит до различных типов плитки, цены сильно различаются.Резиновая и виниловая плитка может стоить от 2 до 8 долларов за квадратный фут.

    Когда дело доходит до плитки, существует почти бесконечное разнообразие. Некоторые стили выглядят как дерево или камень, и они бывают практически любого цвета или рисунка, которые только можно вообразить. Их также легко установить, так как большинство из них имеют взаимно соединяющиеся соединения, поэтому вы также можете сэкономить время и деньги, укладывая пол самостоятельно.

    Еще одним плюсом напольных покрытий этого типа является то, что они водонепроницаемы, устойчивы к пятнам и обладают высокой прочностью.Плитка - очень популярный выбор для подвалов.

    Читать далее: Можете ли вы выложить плитку на плитку?

    Листовой настил
    Оксана Волина / Shutterstock

    Листовой пол бывает практически из тех же материалов, дизайна и текстуры, что и плитка. Разница в том, что, как следует из названия, материал будет представлен в виде листа, который будет раскатан при установке, а не будет состоять из отдельных квадратов, которые необходимо соединить.

    У листового пола есть несколько плюсов и минусов.Это немного дешевле, чем облицовка плиткой (0,75–5 долларов), но установка не так проста. Материал поставляется в большом рулоне, который необходимо правильно расположить и разрезать. Часто профессиональный монтаж дает лучший результат, что может свести на нет экономию.

    Кроме того, этот пол гораздо более четко показывает недостатки под плиткой, чем плитка. Если вы устанавливаете настил из листового металла, укладка на черный пол продлит срок его службы.

    3. Варианты, требующие чернового пола

    Установка чернового пола открывает более широкий мир вариантов напольного покрытия для вашего подвала.Если вы твердо намерены использовать плитку, то сначала установите черновой пол, чтобы ваши вложения в пол прослужили дольше и под ногами было теплее.

    Виниловые доски
    Дмитрий Калиновский / Shutterstock

    Виниловые доски - очень популярный и универсальный стиль напольных покрытий для подвальных помещений. Некоторые из наиболее часто используемых вариантов имеют текстуру, цвет и узоры, имитирующие внешний вид деревянного пола.

    Это очень доступный и практичный способ создать впечатление теплого пола из натурального дерева в подвальном помещении, которое обычно не очень подходит для натурального дерева.Этот стиль напольных покрытий состоит из досок и листов, причем доски снова легче установить и заменить при необходимости.

    Однако, если вы устанавливаете черновой пол и нанимаете для этого подрядчика или строителя, то, возможно, стоит нанять и профессиональную укладку напольного покрытия, если вы решите использовать винил. Стоимость разумная, от 2 до 7 долларов за квадратный фут.

    Инженерная древесина
    Krasula / Shutterstock

    Влага и потенциальная возможность затопления подвалов делают их непригодными для использования в качестве напольных покрытий из натуральной твердой древесины.Тем не менее, эстетика паркетных полов по-прежнему достижима, если вы хотите, чтобы ощущение тепла и уюта дополняло семейное пространство.

    Engineered wood сочетает в себе тонкий слой натурального дерева с более прочным и долговечным нижним слоем, объединяя лучшее из обоих миров. Он выглядит и ощущается как настоящий деревянный пол, по составу похожий на фанеру, за исключением того, что его толщина составляет около 0,5 дюйма или меньше.

    Цена на этот тип напольных покрытий также довольно разумна - около 4–7 долларов за квадратный фут.Он по-прежнему отличается долговечностью и простотой установки, как и многие стили, о которых мы уже упоминали: многие типы поставляются с блокирующими досками, которые позволяют легко складывать по одной части, а также заменять одну часть, если это необходимо.

    Часто задаваемые вопросы

    Какой пол является водонепроницаемым для подвалов?

    Эпоксидная краска и герметичный бетон - два лучших варианта гидроизоляции полов в подвалах. Они также прочные и доступные.

    Могу я просто покрасить бетонный пол в подвале?

    Да, покраска бетонного пола - это вариант, который прекрасно смотрится в подвале.Однако имейте в виду, что обычная краска снимется в течение нескольких месяцев, поэтому рекомендуется использовать краску для бетона.

    Какой тип полов самый дешевый?

    Листовой винил в целом является самым дешевым напольным покрытием на рынке. Однако имейте в виду, что его установка может быть сложной задачей и может потребовать помощи профессионала. Полы из ламината и виниловых досок - следующие самые дешевые варианты.

    Какой пол в подвале вы выберете?

    Когда дело доходит до выбора пола для подвального помещения, нет предела! В зависимости от того, для чего вы хотите использовать свое пространство, есть варианты, которые охватывают любой бюджет и уровень вовлеченности.

    Добавить комментарий